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    PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒說明書

    發布時間: 2016-06-30   

    PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒說明書

     

    PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結合而產生熒光信號來精確定量樣品中DNA含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、 成功實驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環境中DNA含量分析。產品嚴 格無菌,即到即用,性能穩定,高度敏感。

     

    技術背景:

    作為 DNA 染色劑之一的 PicoGreen 熒光染料特異性地與樣品中雙鏈 DNA 結合,產生熒光信號。PicoGreen 技術可以檢測到低達 0.5 納克雙鏈 DNA 的變化。DNA 的微量增加引起熒光信號強度(Intensity)或相對熒 光單位(RFU)的顯著增加。其自發熒光(Autofluorescence)忽略不計,重復性標準差異(Standard       Deviation 低,不受樣品化學成分的干擾。

     

    產品內容:

    染色液(Reagent A  微升

    稀釋液(Reagent B  毫升

    標準液(Reagent C  毫升

    產品說明書 1

     

    保存方式:

    保存 染色液(Reagent A)和 標準液(Reagent C)在-20冰箱里,其余的保存在 4冰箱里, 染色液(Reagent A)避免光照,有效保證6個月

    用戶自備1.5 毫升離心管:用于工作液配制的容器比色皿或 96 孔板:用于熒光分析的容器 熒光分光光度儀或熒光酶標儀:用于熒光定量分析

     

    PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒實驗步驟:

     

    一、 測定準備:

    1.準備好待測樣品,置于冰槽里

    2.設定好熒光分光光度儀(溫度為 37):激發波長 480nm,散發波長 530nm,并置零

    3.實驗開始前,將-20冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出 xx 毫升 稀釋液(Reagent B)到新的 1.5 毫升離心管,加入 xx 微升 染色液(Reagent A),混勻后,用錫紙包裹,標記為染色工作液,放在暗室里。然后進行下列操作。

     

    二、 構建標準曲線:

    1.準備好 5  1.5 毫升離心管,標記為 1  5 號管

    2.分別加入 xx 微升 稀釋液(Reagent B)到每個離心管

    3.移取 xx 微升 標準液(Reagent C)到 1 號管,混勻

    4. 小心移取 xx 微升 1 號管稀釋的 標準液(Reagent C)到 2 號管,混勻

    5.小心移取 xx 微升 2 號管稀釋的 標準液(Reagent C)到 3 號管,混勻

    6. 小心移取 xx 微升 3 號管稀釋的 標準液(Reagent C)到 4 號管,混勻

    7.將 1  5 號管放進冰槽里備用;標準管含量見下表:

     

    管號

    緩沖液(Reagent B

    標準液(Reagent C

    標準 DNA 總量

    1

    xx 微升

    xx 微升

    xx 微克

    2

    xx 微升

    xx 微升 1 號管

    xx 微克

    3

    xx 微升

    xx 微升 2 號管

    xx 微克

    4

    xx 微升

    xx 微升 3 號管

    xx 微克

    5

    xx 微升

    空對照

    0

     

    8.移取 xx 微升含有 染色液(Reagent A)和 稀釋液(Reagent B)的 染色工作液到新的比色皿

    9.加入 500 微升上述配制的標準液

    10.室溫下,孵育 5  分鐘,避免光照

    11.即刻放進熒光分光光度儀測讀:獲得相對熒光單位(Relative   Fluorescence    Unit;RFU

    12.重復實驗步驟 8  11 四次

    13.繪制標準曲線:縱座標(Y  軸)為相對熒光單位(RLU);橫坐標(X  軸)為 DNA  含量(微克)

     

    三、 樣品檢測

    1.移取 xx 微升含有 染色液(Reagent A)和 稀釋液(Reagent B)的 染色工作液到新的比色皿

    2.加入 500 微升待測樣品

    3.室溫下,孵育 5 分鐘,避免光照

    4.即刻放進熒光分光光度儀測讀:獲得相對熒光單位(Relative   Fluorescence   Unit;RFU

    5.根據標準曲線獲得樣品對應 DNA 含量(微克)

    6.樣品實際 DNA 濃度:

     

    PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒注意事項:

    1.本產品為 20 次(比色皿)和 100 次(96 孔板)操作,包括標準曲線測定

    2.操作時,須戴手套

    3.使用新鮮配制的 染色工作液,務必不要超過 2 小時,且注意避光

    4.建議使用塑料管配制 染色工作液,而不是玻璃制品

    5.孵育時,避免光照

    6.系統檢測,標準曲線測定 1 次即可;如果儀器更換,則需要重新測定 1 

    7.如果熒光讀數過高,可以相應稀釋樣品量

    8.可以使用熒光酶標儀檢測,試劑用量和體系均除以 5,包括標準 DNA 含量,其計算公式[根據標準曲線獲得樣品對應DNA  濃度(微克)X樣品稀釋倍數]÷0.1(樣品容量;毫升)=微克/毫升

    9.鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈 DNA  RNA 不會干擾檢測

    10.本公司提供系列DNA檢測試劑產品

     

    質量標準:

    1.本產品經鑒定性能穩定

    2.本產品經鑒定高度敏感

     

    使用承諾:

    上海滬崢秉著信譽至上、客戶滿意、質量承諾的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后,應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定,保證 說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題,請立即以書面形式(實驗報告)與本公司聯系,并將該產品退回,經檢驗確系產品質量所致,本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致,本公司不承擔由此造成的損失。


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