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    細胞凍存操作要點

    發布時間: 2016-11-30   

        1、細胞凍存前12~24h,換新鮮培養基,使細胞一直處于對數生長期。

      2、待細胞長至80%匯合時胰酶消化,用新鮮培養基吹打后制成細胞懸液,1000rpm離心10min。懸浮細胞則直接離心。

      3、棄上清,加入凍存液重懸細胞沉淀,調整細胞濃度為3×106~1×107cells/mL。將細胞懸液分至凍存管內,每管1~1.5mL,擰緊蓋子。在管壁上做好標記,標明細胞名稱、凍存日期等。(細胞凍存液配方可為胎牛血清:培養基:DMSO=4:6:1或胎牛血清:培養基:DMSO=1:9:1或胎牛血清:DMSO=9:1,可根據各實驗室實際條件調整)

      4、按下列順序依次降溫:室溫→4℃20min→-20℃30min→-80℃過夜→液氮保存。也可使用程序降溫盒更為方便,細胞凍存管放入程序降溫盒內可直接放入-80℃過夜,再轉至液氮罐內。注意程序降溫盒內異丙醇的量必須高于最低刻度線;凍存5次后異丙醇需要跟換一次,以免影響凍存效果。

      5、細胞凍存后應取出一管復蘇,檢測細胞的存活率。理論上細胞可在液氮內長期保存,為穩妥起見可在細胞凍存半年后復蘇培養,觀察細胞生長情況,再繼續凍存。


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