• <xmp id="4eu8w">
  • <menu id="4eu8w"><tt id="4eu8w"></tt></menu>
    <nav id="4eu8w"></nav>
  • 新聞分類
      --沒有找到相關新聞--
    聯系方式
    • 上海滬崢生物科技有限公司
    • 聯系人:李小姐
    • 電話:021-20421762
    • 傳真:021-68969289
    • 郵箱:869248833@qq.com
    • 地址:上海市,懿行路971弄

    實時熒光定量PCR(real-time PCR)的Ct值是什么意思?

    發布時間: 2019-07-18   

    實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)是一種在DNA擴增反應中,以熒光化學物質測每次PCR循環后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。

    Real-timePCR是在PCR擴增過程中,通過熒光信號,對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數時期,模板的Ct值和該模板的起始拷貝數存在線性關系,所以成為定量的依據。

    1、Ct值(Cycle threshold,循環閾值)的定義

    在熒光定量PCR技術中,有一個很重要的概念就是Ct值。C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。

    2、熒光閾值(threshold)的設定

    PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號,熒光閾值的缺?。J)設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍,即:threshold = 10*SDcycle 3-15

    3、Ct值與起始模板的關系

    每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系,公式如下。

    Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)

    n為擴增反應的循環次數,X0為初始模板量,Ex為擴增效率,N為熒光擴增信號達到閾值強度時擴增產物的量。

    起始拷貝數越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫坐標代表起始拷貝數的對數,縱坐標代Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

    正常情況下,所有Ct值的范圍都應該在15-35之間,在22-26之間最理想。不過一些專家認為Ct值在10以上就可以接受,不需要那么嚴格。上限在35-40不那么準,但如果只是為了測個定性也可以接受。

    4、Ct值的重現性

    PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性極好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。


    黑人巨大精品欧美一区二区母乳一级片丨欧美A级毛欧美1级a大片式放丨中国xxxx性毛片免费xxxx丨国产精品私拍99 pans大尺度
  • <xmp id="4eu8w">
  • <menu id="4eu8w"><tt id="4eu8w"></tt></menu>
    <nav id="4eu8w"></nav>