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    用于RNAi的慢病毒包裝簡要程序

    發布時間: 2020-03-18   

    以六孔板中的1孔為例,每個樣品需要1×10∧6個293FT細胞。
    1、取1.5ml滅菌EP管,加入1.5μg包裝混合質粒和0.5μg表達質粒以及250μl的無血清Opti MEM。輕柔混勻,室溫孵育5min。
    2、取1.5ml滅菌EP管,取9μl 脂質體2000l溶于250μl無血清Opti-MEM I培養基中。輕柔混勻,室溫孵育5min。
    3、將DNA溶液和脂質體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min
    4、用胰酶消化并記數293FT細胞。用含血清的DMEM培養基重懸細胞。
    5、在六孔板中每孔,加入1ml含血清的生長培養基,再加入DNA-脂質體復合物。
    6、將1ml重懸的293FT細胞(1×10∧6個細胞/ml)加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育過夜。
    7、移除含有DNA-脂質體復合物的培養基移除,代之以DMEM(含丙酮酸鈉和非必須氨基酸)。
    7、轉染后48-72h收獲含病毒的上清。3000 rpm 離心20min,去除沉淀。
    8、病毒上清-80°C貯存。
    包裝出來的慢病毒對NIH/3T3細胞達90%以上感染效率。

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