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  • 產品分類
    聯系方式
    • 上海滬崢生物科技有限公司
    • 聯系人:李小姐
    • 電話:021-20421762
    • 傳真:021-68969289
    • 郵箱:869248833@qq.com
    • 地址:上海市,懿行路971弄
    禽傳染性喉氣管炎(AiLTV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
    • 品牌:滬崢生物
    • 產地:國內
    • 型號:50T/盒
    • 貨號:HXG459
    • 價格: ¥2380/盒
    • 發布日期: 2021-03-25
    • 更新日期: 2024-06-11
    產品詳請
    產地 國內
    品牌 滬崢生物
    貨號 HXG459
    用途 僅用科研
    規格 50T/盒

    實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程, 通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

    【使用方法】

    1.樣品處理(樣本處理區)

    樣本前處理:

    取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g,手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中, 8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

    2.DNA 提取

    DNA 的提取采用DNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

    2.1試劑配制(試劑準備區)

    根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

    2.3步驟 循環數 溫度 時間 收集熒光信號

    1 1 cycle 95℃ 10min

    2 40 cycles 94℃ 15sec

    55℃ 30sec

    3結果分析判定

    3.1結果分析條件設定

    設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

    3.2判斷

    a)檢測通道 Ct 值≤30,有 FAM 熒光信號檢出,并出現典型的擴增曲線,判斷樣品為陽性。

    b)當 30

    4.質控標準

    a)空白對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35,未出現典型的擴增曲線。

    b)陰性對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35,未出現典型的擴增曲線。

    c)陽性對照:有 FAM 熒光信號檢出,并出現典型的擴增曲線,Ct 值<30。

    d)以上應同時滿足,否則本次實驗無效。



    【注意事項】

    所有操作嚴格按照說明書進行;檢驗過程中,參照《GB/T 27403 實驗室質量控制規范 食品分子生物學檢測》的規定進行。

    試劑盒內各種組分使用前應自然融化,混勻并短暫離心;

    反應液應避光保存;

    反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

    使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

    樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

    實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

    試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全   通則》進行處理。







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