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    • 上海滬崢生物科技有限公司
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    禽流感通用/新城疫病毒(AIV-U/NDV)試劑盒(雙重熒光-PCR法)
    • 品牌:上海滬崢
    • 產地:國內
    • 型號:50T/盒
    • 貨號:HXG772
    • 發布日期: 2021-03-30
    • 更新日期: 2024-06-06
    產品詳請
    產地 國內
    品牌 上海滬崢
    貨號 HXG772
    用途 僅供科研
    規格 50T/盒
    是否進口

    城疫病毒(AIV-U/NDV)試劑盒(雙重熒光-PCR法)為上海滬崢主要產品,其特點靈敏性高 、特異性高,判斷陰陽性結果標準,廠家供貨,品質保證,價格優惠,歡迎來電咨詢!

    產品名稱:新城疫病毒(AIV-U/NDV)試劑盒(雙重熒光-PCR法)

    英文名稱:Diagnostic Kit for AIV-U/NDV) Gene DNA (Real-Time PCR Method)

    包裝:50T

    預期用途】本試劑盒適用于檢測/新城疫病毒(AIV-U/NDV)基因,用于篩查待檢測植物中是否含有AIV-U/NDV)成分。其檢測結果僅供參考。

    【檢驗原理】本試劑盒用國家標準的 hLTF 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術進行轉基因成分的檢測。

    【試劑組成】

    酶液

    50μL×1 管

    AIV-U/NDV)反應液

    500μL×2 管

    AIV-U/NDV)陽性質控品

    50μL ×1 管

    陰性質控品

    250μL ×1 管

    說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

    【儲存條件及有效期】-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融,反復凍融次數不超過 5 次。有效期 12 個月。

    【適用儀器】ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

    【標本采集】稱取 200g 樣品。

    【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 0℃冰壺。

    【使用方法】. 樣品處理(樣本處理區)樣本前處理


    固體樣本:用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。

    2 DNA 提取

    對于固體標本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:

    1) 每個樣品取 2 個平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;

    2) 加入 600μL 預熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min, 期間顛倒混勻 5 次;

    3) 室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯酚:異戊醇溶液和*:異戊醇溶液各抽提一次;

    4) 室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5),-20℃放置 2-3h;

    5) 4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

    6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。

    油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒,按說明操作。

    試劑配制(試劑準備區)

    根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

    試劑

    AIV-U/NDV) 反應液

    酶液

    用量

    20μL

    1μL

    加樣(樣本處理區)將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

    實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。

    主要服務:DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

    主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

    PCR反應五要素:

    參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

    引物: 引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

    將四個工作標準品的濃度輸入,F1(FAM)和 F2(HEX)通道選擇樣點擬合法進行分析,F1(FAM)通道基線 (零點調整)取為 12—14 個循環的熒光信號,F2(HEX)通道基線(零點調整)取為 23—25 個循環的熒光信 號,噪聲容限以基線超過正常陰性對照品擴增曲線(無規則的噪音線)的*點,或根據儀器噪音情況另行 調整,并且基線調整的位置在 0.5-5 的范圍內,然后進行定量分析。 2 檢測樣本中 1×103 IU/ml≤HBV DNA≤1×108 IU/ml,測定結果有效,可直接報告陽性及相應的拷貝量; 3 檢測樣本中 HBV DNA>1×108 IU/ml,即可直接報告為>1×108 IU/ml,也可用正常人 HBV DNA 陰性血清按 10 倍梯度做相應稀釋,使其拷貝量落在 1×105 —5×107 IU/ml 范圍內再重新測定,測定結果應以稀釋倍數進 行校正; 4 檢測樣本 HBV DNA 的拷貝量為 1×102 ~1×103 IU/ml 時,建議對該樣本進行雙份重試,如雙份樣本重試仍 在 1×102 ~1×103 IU/ml,則按實際值計算,如雙份或一份重試均<1×102 IU/ml,則判斷為陰性; 5 Ct 值不顯示時或 HBV DNA 的拷貝量<1×102 IU/ml,該樣本 HBV DNA 為陰性。

    公司產品涵蓋ELISA研發、PCR試劑盒,細胞培養,各種生化試劑、各種酶類、分子生物學試劑盒、培養基、自產實驗室耗材、小型儀器等。此外、上海滬崢還代理了sigma,R&D,ScienCell,ATCC,wak0,omega,Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等國外各類*公司的產品。





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